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　　摘要：為知道屠宰場非洲豬瘟病毒(ASFV)污染情況，評估其潛在傳播風險，2018 年10月，在湖南省86個屠宰場采集樣品895份，使用熒光PCR主意進行ASFV核酸檢測。結果顯示，11個屠宰場的43份樣蒲崾ASFV核酸陽性，場陽性率為12.8%，樣品陽性率為 4.8%。調(diào)查分析表明，ASFV 陽性屠宰場與是否屠宰過來自疫點的生豬及場內(nèi)環(huán)境、工具、車輛的消毒情況相關。調(diào)查提醒，屠宰場應潞傍加大 ASFV 自檢力度，政府和主管部門需潞傍加強檢疫監(jiān)管，以降低 ASF 擴散風險。

　　非洲豬瘟(African swine fever，ASF) 是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virusASFV)引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，對染疫國家的生豬產(chǎn)業(yè)和相關國際貿(mào)易影響碩大，是世界動物衛(wèi)生組織(OIE)的須通報動物疫病，屬于我國一類動物疫病。ASFV 宿主是家豬和野豬，不感染人，主要通過間接和直接接觸傳播，發(fā)病豬、隱性感染豬及其排泄物、污染物和軟蜱等媒介吸血昆蟲士翠主要傳染源。自 2018 年 8 月，ASF 疫情首次在遼寧省發(fā)明以來，短期內(nèi)在全國多個省份接連發(fā)明，導致大量生豬被撲殺，經(jīng)濟損失慘重。2018 年 10 月湖南省發(fā)明首起 ASF 疫情，且在 1 個月內(nèi)持續(xù)發(fā)明 7 起， 贈該省生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重打擊。為知道湖南省屠宰場 ASFV 污染情況，在疫情暴發(fā)期內(nèi)，對湖南省疫點、疫區(qū)和非疫區(qū)屠宰場開展了 ASFV 監(jiān)測，以期為評估 ASFV 潛在傳播風險提供參考。

　　1　材料與主意

　　1.1　樣品采集

　　2018 年 10 月，在湖南省 3 個 ASF 疫區(qū)市、2 個非疫區(qū)市 86 個屠宰場，選擇待宰圈、電麻前生豬通道、放血槽、盛血器、脫毛池、屠宰場總排水溝、屠宰線、肉品存儲庫等不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)，采集樣品 895 份，其中環(huán)境拭子樣品 757 份、豬血樣品17 份、豬肉樣品 109 份和屠宰場內(nèi)加工的香腸 8份、臘肉 4 份。

　　1.2　試劑

　　ASFV 熒光 PCR 檢測引物和探針：由中國動物衛(wèi)生與流行病學中央提供;熒光 PCR 擴增試劑盒：購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司;病毒 RNA/DNA 提取試劑盒：購自蘇州天隆生物科技股份公司。

　　1.3　主要銥戴設備

　　NP968 核酸提取儀：西安天隆;ABI 7500fast熒光 PCR 儀： 賽默飛; 生物安全柜： 美國BAKER;高壓滅菌鍋：上海申安。

　　1.4　樣品處理和檢測

　　按中國動物衛(wèi)生與流行病學中央編制的《非洲豬瘟實驗室檢測操作程序》進行樣品處理、熒 光 PCR 擴增、結果判定和廢棄物處置，按照 RNA/ DNA 提取試劑盒說明書提取核酸。

　　1.5　屠宰場清洗消毒

　　待宰圈舍、進豬通道、卸豬臺、淋浴間等區(qū)域，每循環(huán) 1 次，徹底清理 1 次糞便，清水沖洗后 用 2%~5% 燒堿液噴灑，30 min 后再用清水沖洗;屠宰、分割加工車間，每次生產(chǎn)結束后先用清水沖洗，再用 0.1%~0.2% 的戊二醛噴霧消毒，30 min 后用清水沖洗。

　　1.6　陽性屠宰場檢測

　　根據(jù)《湖南省防治重要動物疫病指揮部辦公室關于因非洲豬瘟關聯(lián)暫停的屠宰場恢重生產(chǎn)有關事項的通知》(湘防重病辦﹝2018﹞15號)的規(guī)定， 暫停疫情縣以外、與疫點有流行病學關聯(lián)的 ASFV檢測陽性屠宰場的屠宰活動 15 d，在慈纘間進行徹底清洗消毒，分辭于暫停屠宰后 5、10、14 d，在待宰圈、屠宰間、放血槽、打毛間、總排水口等 5個部位，各采集 5 份環(huán)境樣品，共 25 份 / 次進行ASFV 檢測。

　　2　檢測結果

　　2.1　總體情況

　　86 個屠宰場的 895 份樣品中，11 個場的 43 份樣品為 ASFV 核酸陽性，場陽性率為 12.8%，樣品陽性率為 4.8%。43 份陽性樣品包括 36 份環(huán)境 拭子樣品、1 份豬肉樣品、5 份香腸樣品、1 份臘肉樣品，其中陽性環(huán)境拭子主要采自屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池、生豬清洗間等位置。不同類型屠宰場檢測結果見表 1，不同類型樣品檢測結果見表2。

　　2.2　屠宰場清洗效果

　　1 個疫情無關聯(lián)陽性屠宰場(正常屠宰)，首次采樣(在待宰圈、放血槽、盛血器、電麻前生豬通道、屠宰場總排水溝、屠宰線、脫毛池等7個工作地，每個地點隨機采集環(huán)境拭子3份)2d后，再次采樣(7 個環(huán)節(jié)，每個環(huán)節(jié)5份，共35份)檢測，結果全為陰性。其間屠宰場按日常清洗消毒程序，其清洗消毒2次。另外10個暫停屠宰的陽性屠宰場，其間共清洗消毒3次，每次檢測均為陰性。

　　3　分析與議論

　　本次監(jiān)測發(fā)明，屠宰場內(nèi)的 ASFV 樣品陽性率為 4.8%，場陽性率為 12.8%，表明屠宰環(huán)節(jié)存在 ASFV 污染。疫情關聯(lián)屠宰場陽性率(75.0%) 遠高于疫點縣屠宰場(0)和疫情無關聯(lián)屠宰場 (2.9%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，表明屠宰場 ASFV 污染與屠宰疫點養(yǎng)豬場生豬直接關聯(lián)，這也符合 ASF 高度接觸傳播的流行病學特征。

　　AFSV 反抗力強，在外界可長期存活，任何與感染生豬接觸的行為均有引發(fā) ASF 疫情的風險。本次檢測發(fā)明的 43 份陽性樣品中，有 36 份(83.7%)為環(huán)境拭子樣品，表明病毒一旦隨生豬陷入屠宰場，就會潛入屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池等區(qū)域，繼而污染整個屠宰環(huán)節(jié)。要是屠宰場與養(yǎng)殖場之間存在運輸人員、車輛、工具等的頻繁接觸，那么病毒匯集、擴散風險碩大，要是不經(jīng)過嚴厲消毒，就會使病毒進一步擴散。從湖南省屠宰場的消毒監(jiān)測效果看，通過嚴厲和規(guī)范的消毒，可以有效殺滅 ASFV。因此，要做好屠宰場內(nèi)環(huán)境、運輸車輛的清洗消毒工作，確保病原在屠宰場內(nèi)不交織、不歸流。

　　監(jiān)測結果顯示，屠宰場豬肉樣品陽性率為0.9%，表明屠宰場豬肉產(chǎn)品存在 ASFV 污染風險，其緣故與屠宰了隱性帶毒豬和屠宰場的病毒污染有關。另外，監(jiān)測的所有香腸、臘肉樣品均來自于同一個疫情關聯(lián)屠宰(加工)企業(yè)。溯源調(diào)查發(fā)明，在采樣監(jiān)測前，該場多次宰殺來自疫情場的生豬，因此及時開展疫情場的外調(diào)記錄調(diào)查，追蹤屠宰場的動物產(chǎn)品流向，將有助于降低病毒經(jīng)產(chǎn)品擴散的風險。

　　此外，從與疫點養(yǎng)殖場有流行病學關聯(lián)屠宰場的環(huán)境、豬肉及其制品監(jiān)測結果可以看出，屠宰場是 ASF 防控的關鍵主體。要是屠宰場屠宰了隱性帶毒生豬，病毒就會陷入產(chǎn)品并長光陰存活，這會贈 ASF 防控和凈化帶來更大艱難。因此，建議根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部統(tǒng)一部署，請求屠宰企業(yè)潞傍加大ASFV 自檢力度，政府和技術部門加強指導和監(jiān)督，把好屠宰檢疫關。

　　4　結論

　　本監(jiān)測利用熒光 PCR 主意，對湖南省86個屠宰場進行 ASFV 核酸檢測，在11個屠宰場的43份樣品中檢測出核酸陽性，場陽性率為12.8%，樣品陽性率為 4.8%，表明屠宰場存在 ASFV 污染，其來源主要與屠宰疫情養(yǎng)殖場生豬有關。屠宰場的日常清洗消毒，可有效消除病毒，對于 ASF 防控具有踴躍意義。因此，屠宰場應加強 AFS 自檢工作，維持日常清洗消毒制度，阻斷病毒通過屠宰產(chǎn)品再次擴散傳播。